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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
免疫熒光技術利用熒光分子標記的抗體對與之結合的抗原進行定位，實現對蛋白質、聚糖蛋白、小生物分子及非生物分子等進行亞細胞可視化觀察。在此過程中，組織中的自發(fā)熒光往往會嚴重干擾觀察。自發(fā)熒光是在免疫熒光檢測過程中產生的與目的信號無關的背景熒光信號的統(tǒng)稱，其產生的原因主要來自于組織本身的組分，例如黃素、卟啉、植物葉綠素、膠原蛋白、彈性蛋白、紅細胞、脂褐素等都會產生較強的自發(fā)熒光，顯著影響免疫熒光實驗的信噪比。此外組織固定中使用的福爾馬林、多聚甲醛等物質也會產生大量的自發(fā)熒光。
本產品可有效減少組織自發(fā)熒光，提高免疫熒光檢測的信噪比。其中A液有效成分為二價銅離子，可有效減少紅細胞的自發(fā)熒光，B液有效成分為蘇丹黑，能顯著降低脂褐素引起的自發(fā)熒光。
儲存與運輸
常溫避光保存，有效期12個月。
使用方法
1. 免疫標記前的自發(fā)熒光淬滅：組織切片在經過抗原修復以后，用組化筆畫圈圈出組織，然后滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A液覆蓋組織室溫孵育30 min，純水洗5 min。
2. 組織切片進行常規(guī)的封閉、一抗孵育、二抗孵育、DAPI復染細胞核等免疫熒光檢測步驟。
3. 免疫標記后的自發(fā)熒光淬滅：滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑B液覆蓋組織室溫避光孵育5 min，流水沖洗3 min。
4. 封片：玻片置于PBS中晃動洗滌（可置于脫色搖床上）3次，每次5 min。切片稍甩干后封片，鏡檢。
注意事項
1. 不同樣本其自發(fā)熒光原理不同，使用組織自發(fā)熒光淬滅劑的效果可能會有差異。
2. 理論上講，針對自發(fā)熒光的淬滅劑也會一定程度降低抗體的熒光強度。經測試，本試劑對自發(fā)熒光的淬滅程度遠遠超出抗體熒光強度的降低，在二者之間有較好的平衡。
3. 加入組織自發(fā)熒光淬滅劑B液后組織會染成深藍色，但是不會影響熒光拍照。
4. 切片經B液孵育完以后可以用水或者PBS洗滌，但不能用含吐溫的溶液洗滌，否則B液被過度洗去影響背景熒光淬滅效果。
5. 組織自發(fā)熒光淬滅劑B液每次用完后務必將瓶蓋擰緊，防止溶劑揮發(fā)。
6. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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