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產(chǎn)品詳情
操作說(shuō)明
注意事項(xiàng)
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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支原體檢測(cè)試劑盒（PCR法） |
FKU019 |
50T |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞各個(gè)方面都造成不良影響，已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)中高度重視的問題，因此，定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè)是十分必要的。本支原體檢測(cè)試劑盒是采用PCR方法，特異性的檢測(cè)各種培養(yǎng)細(xì)胞生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物、動(dòng)物血清等）中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物是針對(duì)支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)的特異性引物，可直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液作為PCR模板，特異性擴(kuò)增支原體DNA，搭配配套的Mycoplasma PCR Mix（2×）一小時(shí)內(nèi)即可完成，本試劑盒檢測(cè)靈敏度高，可檢測(cè)低至20個(gè)拷貝的支原體。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋（wet ice）運(yùn)輸；-20℃保存，有效期12個(gè)月。
組成
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Component Number |
Component |
G1900-50T |
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G1900-1 |
Mycoplasma PCR Mix（2×） |
1 mL |
|
G1900-2 |
Mycoplasma Primer Mix |
100 μL |
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G1900-3 |
Positive Control |
50 μL |
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G1900-4 |
Mycoplasma Free Water |
1 mL |
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說(shuō)明書 |
1份 | |
操作步驟
1. 樣品準(zhǔn)備：取適量待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用Mycoplasma Free Water稀釋后，取適量樣本于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板；
2. PCR體系配制：每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照（將1 μL待檢樣品換成等量的Mycoplasma Free Water）與陽(yáng)性對(duì)照（在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template），實(shí)驗(yàn)時(shí)戴一次性口罩與手套，謹(jǐn)慎操作，防止操作不當(dāng)引入外源支原體污染；
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Component |
Volume |
|
Template |
1 μL |
|
Mycoplasma Primer Mix |
2 μL |
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Mycoplasma PCR Mix（2×） |
10 μL |
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Mycoplasma Free Water |
To 20 μL |
3. PCR程序設(shè)置：
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Step |
Temperature |
Time |
Cycles |
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Initial Denaturation |
98℃ |
2 min |
1 |
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Denaturation |
98℃ |
20 s |
30 |
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Annealing |
56℃ |
25 s |
|
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Extension |
72℃ |
10 s |
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Final extension |
72℃ |
5 min |
1 |
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Hold |
4-16℃ |
Forever |
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4. 凝膠電泳：取10 μL PCR產(chǎn)物，使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)；
5. 結(jié)果分析：每次實(shí)驗(yàn)通過(guò)與陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)結(jié)果比較確認(rèn)樣品支原體污染情況，陽(yáng)性條帶大小500 bp左右。如陰性對(duì)照檢測(cè)結(jié)果中有條帶很有可能是PCR體系中出現(xiàn)污染，建議重新實(shí)驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果。如有必要，也可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)測(cè)序，以確定具體的支原體種屬。
注意事項(xiàng)
1. 本試劑盒可以檢測(cè)M.orale，M.arginini，M.bovis，M.fermentans，M.gallisepticum，M.hominis，M.pirum，Ureaplasma spp，M.hyorhinis，M.pneumoniae，A.laidlawii等至少11種以上支原體污染。
2. 所有試劑在使用前于冰上徹底解凍、混勻，使用完畢后于-20℃保存。
3. 每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組建議設(shè)置樣品模板梯度。
4. 操作時(shí)必須佩戴口罩，嚴(yán)格按照PCR操作標(biāo)準(zhǔn)，防止引入外源污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5. 為了確保細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的可靠性及穩(wěn)定性，建議定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè)。
6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬(wàn)物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請(qǐng)于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請(qǐng)保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對(duì)檢驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請(qǐng)于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對(duì)本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償?？蛻粼谑褂眠^(guò)程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時(shí)給予解答。
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