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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
PI，即碘化丙啶，是一種溴化乙啶的類似物，能夠與DNA強力結合，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光，實現對DNA或細胞核的染色。PI不能穿透完整細胞膜，但能穿透凋亡晚期細胞及死細胞的破損細胞膜，利用該特點，PI通常與Calcein-AM或FDA等熒光探針聯合使用，進行活死細胞染及觀察色，或采用流式細胞儀相對定量檢測細胞凋亡（apoptosis）及細胞周期。PI-雙鏈DNA復合物的最大激發(fā)波長為535nm，最大發(fā)射波長為615nm。
本產品PI染色液為即用型，PI濃度為100 μg/mL，可直接用于壞死細胞或組織的細胞核染色，以及細胞懸液用此染液染色后可以用于流式細胞儀檢測細胞周期。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期6個月。
使用方法
l 流式細胞儀檢測細胞周期操作步驟：
1. 培養(yǎng)好的活細胞經消化、PBS洗滌、低速離心收集得到細胞沉淀。
2. 向細胞沉淀中緩慢加入1-3 mL -20℃預冷的90%乙醇，重懸細胞，冰浴過夜。
3. 1500轉離心5min收集細胞，以PBS重懸，再次離心，去除上清液。
4. 加入250 μL PBS重懸細胞。
5. 加入2 μL濃度為1 mg/mL的RNase A，37℃水浴40 min。
6. 加入50 μL PI染液，避光孵育20 min（時間可根據實驗材料的染色結果調整）。
7. 流式細胞儀檢測。
l 熒光顯微鏡觀察活死細胞操作步驟：
1. 培養(yǎng)好的貼壁細胞，去除培養(yǎng)基，用PBS清洗2次。
2. 將PI染液用PBS稀釋10-20倍，配制成至終濃度為5-10 μg/mL的PI染色工作液。向孔板內加入適量PI染色工作液覆蓋細胞，室溫避光孵育5-10 min。
3. 棄去染色工作，加入PBS覆蓋細胞，熒光顯微鏡觀察。死細胞或凋亡晚期細胞的核呈紅色熒光。
注意事項
1. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。
2. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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