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HE染色
來源：萬物生物 發(fā)布時間：2021-11-02
HE染色（hematoxylin-eosin staining）
HE 染色：又稱蘇木素-伊紅染色法，其中蘇木素是Hematoxylin，簡稱H，伊紅是Eosin， 簡 稱E，HE 染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。 這種方法對組織細胞的各種成分都可著色，經(jīng)過 HE 染色，細胞核被蘇木素染成藍紫色，細胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。蘇木素是堿性染料，藍紫色，可以使細胞核等著色。被蘇木素著色的結(jié)構(gòu)本身為酸性，具有嗜堿性(Basophilic)。伊紅是酸性染料，粉紅色?？梢詫⒋蠖鄶?shù)細胞的細胞質(zhì)染成紅色。被伊紅著色的結(jié)構(gòu)本身為堿性，具有嗜酸性(Acidophilic)。
HE染色法過程：
1、脫蠟
1.1從溫箱中取出烤干的切片,立即投入二甲苯中脫蠟5～10min(可在二瓶中進行),脫蠟時間長短取決于蠟是不徹底溶解。氣溫低可延長時間,氣溫高可適當縮短時間或在溫箱中加速脫蠟。
1.2移入無水酒精(100%)(二瓶)中,約2min。
1.3移入90%酒精中(二瓶),約2min。
1.4移入80%酒精中(二瓶),約2min。
1.5移入70%酒精中,約2min。
1.6移入水中,洗去酒精,約2～3min。
1.7移入蒸餾水中,約2min。
2、染色
2.1移入蘇木素中,浸染5min,一般以稍深染為宜。
2.2移入水中,洗去蘇木素和浮色,約1min。
2.3移入分化液(1%鹽酸酒精)中,分化幾秒至30秒鐘, 使切片褪色至淡蘭紅色即可。分化的作用,可使細胞漿蘭色脫去,而細胞核更加清晰,鮮麗,分化不足時,胞漿帶蘭,胞核過染,分化過度時,胞核太淡,難以辯認,可再退回蘇木素染液, 延長一定時間。
2.4移入流水中,洗滌30～60min,使組織呈鮮蘭色或天蘭色(蘭化)。
2.5移入伊紅液中,浸染2～5min,如著染緩慢 , 可在伊紅液中加入冰醋酸 (100ml伊紅液加1～2滴冰醋酸)以助染。
2.6移入水中,洗去伊紅浮液,并用紗布擦凈玻片上的多余染料。
3、脫水
3.1吸去玻片上的水分后多入80%酒精中,(二瓶)脫水,約1～2min, 如在酒精中褪色很快時,可迅速移入90%酒精或返回伊紅液中復染。
3.2移入90%酒精中(二瓶)脫水,約2～4min。
3.3移入無水酒精(100%酒精)(二瓶)徹底脫水,約4～8min。
4、透明
4.1移入二甲苯Ⅰ中透明3～5min。
4.2移入二甲苯Ⅱ中透明5～10min。
5、封固
用樹膠封固,先從二甲苯Ⅱ中取出切片,將組織外圍的二甲苯迅速擦去,在滴上一滴樹膠于組織片上,然后取干凈的蓋玻片,仔細加在封固劑上,慢慢壓平, 使蓋片位置適中。切片封固后,放在溫箱中烤干,或平置涼干后裝盒。
注意事項
切片脫水透明切片經(jīng)HE染色后，要徹底脫水透明，才能用中性樹膠封蓋。如果脫水不徹底，封片后呈白色霧狀，鏡下觀察模糊不清，且容易褪色。切片1-2級無水乙醇脫水，也可使用石炭酸二甲苯進行脫水。石炭酸有較強脫水能力，但長時間可使切片脫色，因此要經(jīng)過多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
結(jié)果展示：
結(jié)果：細胞核呈藍色，細胞質(zhì)，肌纖維，膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和 細菌可呈藍色或紫藍色。
粘蟲Mythimna separata 腸道HE染色（200X）
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