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細(xì)胞系細(xì)胞株培養(yǎng)構(gòu)建
來源：萬物 發(fā)布時間：2021-08-31
1.細(xì)胞系
細(xì)胞系（cell line）指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。 也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。
2.細(xì)胞株
通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株（CellStrain），也就是說，細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
3.細(xì)胞培養(yǎng)
細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長增殖等。
4.基本過程
細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。
1． 凍存細(xì)胞
1）選對數(shù)增生期細(xì)胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液。
2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)5×107／ml左右密度，離心，去上清。
3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。
4）分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液。
5）旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記。
6）凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。
操作時應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷。
2. 復(fù)蘇細(xì)胞
1）從罐中取出凍存管。
2）迅速放入36℃～37℃水浴，不時搖動，使其急速融化，30～60s內(nèi)完成。
3）凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細(xì)胞懸液注入離心管中，再滴加10ml培養(yǎng)液。
4）低速離心(500～1000r／min) 5min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次。
5）用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進(jìn)行培養(yǎng)。
凍存細(xì)胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達(dá)到107／ml，在融后稀釋20倍時，仍能保持5×105／ml數(shù)量
3.傳代培養(yǎng)
1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2）向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。
3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化。
4）吸出消化液，向瓶內(nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化。
5）使用彎頭吸管，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細(xì)胞。
6）用計數(shù)板計數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
7）細(xì)胞培養(yǎng)換液時間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般2～3d后應(yīng)換一次生長液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液。
5.注意事項
1）防止細(xì)胞交叉污染。
2）細(xì)胞污染的預(yù)防。
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標(biāo)書基金實驗咨詢 表觀遺傳組學(xué)分析
課題實驗結(jié)題指導(dǎo) 細(xì)胞分子功能驗證
實驗培訓(xùn)文章潤色 動物模型裸鼠成瘤
臨床檢測科研轉(zhuǎn)化 病理染色分子互作
萬物生物主營業(yè)務(wù)包括實驗動物模型建立、分子生物學(xué)、載體構(gòu)建、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、基因治療實驗、細(xì)胞功能驗證、基因敲出/入、原代培養(yǎng)、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價、藥理毒理學(xué)實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立等多項科研技術(shù)服務(wù)，并建立了涵蓋實驗設(shè)計、項目實施、結(jié)果整理、數(shù)據(jù)分析及策略咨詢等一站式的科研服務(wù)體系并提供全方位科研方案。