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萬物生物 - 慢病毒包裝
來源：萬物 發(fā)布時間：2021-08-31
慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它需要相對較長的孵育時間，所以稱之為“慢”病毒，Lenti在拉丁文中就是慢的意思。它包括人免疫缺陷病毒（HIV）、貓免疫缺陷病毒（FIV）、猿免疫缺陷病毒（SIV）、牛免疫缺陷病毒等。其中研究最多的是HIV-1慢病毒。
慢病毒載體（Lentivirus vector）是以慢病毒基因組為基礎(chǔ)，由所需的目的基因取代部分基因構(gòu)建而成。目前使用的慢病毒載體多采用HIV-1基因組改造而來。與一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相比，慢病毒載體對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力而具有更廣的宿主范圍。慢病毒載體還可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實現(xiàn)持久表達。在感染能力方面可以有效感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，又很少引發(fā)機體免疫反應(yīng)，能達到良好的基因治療效果，具有廣闊的應(yīng)用前景。
慢病毒包裝實驗流程如下：
1.根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，基因序列號等）獲取目的基因；
2.根據(jù)客戶要求選擇對應(yīng)載體；
3. 將目的基因構(gòu)建到慢病毒載體獲得含有目的基因的重組載體；
4. 測序鑒定重組質(zhì)粒，高純化（不含內(nèi)毒素）提取的重組質(zhì)粒；
5. 使用高純提重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 293FT 細胞，進行病毒包裝并收集上清液；
6. 通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒；
7. 使用病毒液感染 293T 細胞，藥物篩選細胞，構(gòu)建穩(wěn)定表達細胞系。
慢病毒使用安全及注意事項
1.慢病毒相關(guān)實驗請在生物安全柜內(nèi)操作。如果使用超凈臺請不要打開風機。
2.慢病毒感染實驗時，請穿實驗服，佩戴口罩和手套，盡量不用將身體的任何部位裸露在安全柜內(nèi)。
3.操作病毒時盡量避免氣霧或者飛濺。如果濺出，請立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干凈。
4.如果需要離心，應(yīng)使用密封性好的離心管，或者用Parafilm膜封口后離心。
5.廢棄的含有病毒的培養(yǎng)基或者病毒接觸過的槍頭、離心管、培養(yǎng)板及培養(yǎng)瓶請用84消毒液（1:20），浸泡一天后丟棄。
6.實驗結(jié)束后請用肥皂清洗雙手。
第二代慢病毒質(zhì)粒 第三代慢病毒質(zhì)粒
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課題實驗結(jié)題指導 細胞分子功能驗證
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