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產品詳情
操作說明
注意事項
產品信息
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產品名稱 |
產品編號 |
規(guī)格 |
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通用型DNA純化回收試劑盒 |
M0k942131 |
100T |
產品簡介
本試劑盒采用獨特的吸附柱，既能從TAE或TBE瓊脂糖凝膠中回收DNA片段，又能用于直接純化PCR產物，滿足多種實驗需要。Buffer GL中含有pH指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠或PCR產物回收是否達到最佳狀態(tài)。使用本產品可回收100 bp-10 kb大小的DNA片段，回收率可達85%。每個吸附柱每次可吸附的DNA量為20 μg。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等實驗。
儲存與運輸
常溫運輸；常溫干燥處保存，有效期12個月。
組成
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Component Number |
Component |
G3631-100T |
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G3631-1 |
Buffer BL |
50 mL |
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G3631-2 |
Buffer GL (Yellow) |
60 mL |
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G3631-3 |
Buffer PW |
2×15 mL |
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G3631-4 |
Elution Buffer |
15 mL |
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G3631-5 |
Bind DNA Mini Columns |
100個 |
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G3631-6 |
Collection Tubes |
100個 |
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說明書 |
1份 | |
實驗步驟
一、從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段
1. （可選步驟）柱平衡：將吸附柱（Bind DNA Mini Columns）置入收集管（Collection Tubes）中，然后在吸附柱中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g離心1 min，去除收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中(請使用當天處理過的柱子)；
2. 用干凈刀片將單一目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量；
3. 向膠塊中加入等倍體積溶液Buffer GL（如凝膠重為0.1 g，其體積可視為100 μL，則加入100 μL溶液Buffer GL，60℃水浴至膠塊完全溶解（其間不斷溫和地上下翻轉離心管，以確保膠塊充分溶解，若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊）（注意：若是對于回收產量要求高，可在加入Buffer GL完全溶膠后再加入1/2膠塊體積的異丙醇以提高回收率；膠塊完全溶解后最好將溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在室溫時結合DNA的能力較強。凝膠完全融解后應呈現(xiàn)淡黃色，即可進行后續(xù)操作。如果膠完全融解后溶液的顏色為紫色或紅色，請使用10 μL 3M乙酸鈉（pH 5.0）將溶液的顏色調為淡黃色后再進行后續(xù)操作）；
4. 將上一步所得溶液全部轉入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：吸附柱容積為800 μL，若樣品體積大于800 μL可分批加入）；
5. 向吸附柱中加入700 μL溶液Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議Buffer PW加入后靜置2-5 min再離心）；
6. 重復操作步驟5；
7. 將吸附柱放入收集管中，10,000 g離心2 min，盡量除去殘留液體。將吸附柱置于室溫放置5 min，徹底晾干（注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)酶切、PCR等實驗）；
8. 將吸附柱放入一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加30~50 μL Elution Buffer或ddH2O（Elution Buffer或ddH2O 60-65℃預熱效果更好），室溫放置2 min，然后10,000 g離心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脫液的體積不應少于30 μL，體積過少會影響回收的效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min，10,000 g離心2 min，將DNA溶液收集到離心管中）。
二、從PCR反應液或酶切反應液中回收DNA片段
1. （可選步驟）柱平衡：將吸附柱（Bind DNA Mini Columns）置入收集管（Collection Tubes）中，然后在吸附柱中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g離心1 min，去除收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中(請使用當天處理過的柱子)；
2. 預估PCR反應液或酶切反應液的體積，向其中加入3倍體積的溶液Buffer GL（加入Buffer GL不少于150 μL），充分混勻（無需去除石蠟油或礦物油）（注意：若是對于回收產量要求高，可在加入Buffer GL后再加入3/4 PCR反應液或酶切反應液的體積的異丙醇以提高回收率；混合后溶液應呈現(xiàn)淡黃色，即可進行后續(xù)操作。如果膠完全融解后溶液的顏色為紫色或紅色，請使用10 μL 3M乙酸鈉（pH 5.0）將溶液的顏色調為淡黃色后再進行后續(xù)操作）；
3. 將上一步所得溶液全部轉入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：吸附柱容積為800 μL，若樣品體積大于800 μL可分批加入）；
4. 向吸附柱中加入700 μL溶液Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：如回收DNA是用于鹽敏感實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議Buffer PW加入后靜置2-5 min再離心）；
5. 重復操作步驟4；
6. 將吸附柱放入收集管中，10,000 g離心2 min，盡量除去殘留液體。將吸附柱置于室溫放置5 min，徹底晾干（注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)酶切、PCR等實驗）；
7. 將吸附柱放入一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加30~50 μL Elution Buffer或ddH2O（Elution Buffer或ddH2O 60-65℃預熱效果更好），室溫放置2 min，然后10,000 g離心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脫液的體積不應少于30 μL，體積過少會影響回收的效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min，10,000 g離心2 min，將DNA溶液收集到離心管中）。
注意事項
1. 溶液Buffer BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫/潮濕或其他不良環(huán)境因素對吸附柱造成的影響，柱平衡步驟也可省略。
2. 使用前請先檢查Buffer PW是否加入指定量的無水乙醇。
3. 各溶液使用后請及時將蓋子擰緊。
產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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